Antecedentes: Recientes estudios en inmuno histo-patogénesis  de  periodontitis se han centrado en las citoquinas porque estos mediadores gobiernan la actividad biológica en los tejidos inflamados en proceso de destrucción, los resultados obtenidos sugieren que las citoquinas están involucradas en los procesos inflamatorios de los tejidos periodontales.

El objetivo de este trabajo fue cuantificar la IL-6 de tejidos periodontales de pacientes  sin compromiso sistémico.

Método: se realizó un estudio descriptivo donde se midió la concentración de Il-6 de los tejidos periodontales de los sujetos de estudio y se correlacionó el comportamiento de la IL-6 en tejidos clínicamente sanos con gingivitis y con periodontitis. Se seleccionaron 35 pacientes,22 mujeres y 13 hombres se dividieron en tres grupos 13 sanos clínicamente, 13 gingivitis y 9 periodontitis crónica, a estos pacientes  se midió: la profundidad de los defectos periodontales, los niveles clínicos de inserción, la pérdida ósea se determinó el índice de sangrado gingival. Se tomaron las muestras de los tejidos se congelaron, se procesaron posteriormente se cuantificaron las concentraciones de Il-6 mediante la técnica de Elisa en niveles de absorbancia en pg/ml luego se correlacionaron los resultados mediante el T de Student y U de Mann-Whitney Los resultados mostraron que  había una diferencia significativa entre los valores de IL-6 de los pacientes con gingivitis comparados con los pacientes clínicamente sanos (p<0.0000003). Entre los pacientes con gingivitis y periodontitis crónica se encontró que  había diferencia  significativa entre los valores de absorbancia de IL-6 (P<0.00001) .Al comparar los niveles de absorbancia entre los tejidos de pacientes con gingivitis y con periodontitis se encontró  diferencia significativa (P<0.0001). Estos resultados mostraron que la concentración  de IL-6 de tejidos periodontales clínicamente sanos es menor que la encontrada en  los tejidos con gingivitis y periodontitis.     

KEY WORDS
 Interleukin 6,bone resorption, periodontitis, periodontal diseases.

THEMATICS FIELDS
Inmunology

INTRODUCCION

La enfermedad periodontal es de etiología multifactorial donde intervienen factores sistémicos, genéticos, bacterianos, ambientales y locales. El compromiso periodontal afecta la integridad de los tejidos de soporte de los dientes que conlleva a la pérdida de los mismos desencadenando alteraciones funcionales, estéticas y sicológicas. Las diferentes patologías periodontales se han agrupado alrededor de manifestaciones clínicas edad, tiempo de aparición y tienen en común la destrucción de los tejidos de soporte de los dientes.
Recientes estudios en inmuno histo-patogénesis de periodontitis se han centrado en las citoquinas porque estos mediadores gobiernan la actividad biológica en los tejidos inflamados en proceso de destrucción, se han reportado estudios de citoquinas, en muestras de tejidos gingivales, fluido crevicular, cultivos celulares de fibroblastos gingivales y sangre periférica, los resultados obtenidos sugieren que las citoquinas están involucradas en los procesos inflamatorios de los tejidos periodontales.
Con el avance de la ciencia en el campo de la inmunología, se han desarrollado pruebas de laboratorio, para cuantificar los mediadores de la inflamación, en este grupo se incluyen las citoquinas. Las interleuquinas pertenecen a una red compleja de proteínas que actúan como mensajeros intercelulares, la interleuquina 6 (IL-6) juega un papel importante en el rol patológico de las condiciones asociadas con la reabsorción ósea, se considera una citoquina multifuncional que regula funciones pleiotróficas de las células y los tejidos; la IL-6 es factor estimulador de la secreción de inmunoglobulinas por parte de los linfocitos B transformados en células plasmáticas, estas son células que tienen un mayor número de receptores específicos para la IL-6, además participa en la hematopoyesis actuando sobre la célula madre pluripotencial con interleuquina 3 (IL-3) y los factores formadores de colonias, también estimula la formación de monocitos, granulocitos y Osteoclastos y en el timo interviene en la maduración de linfocitos T - Se encontró producción espontánea de IL-6 en células mononucleares aisladas de pacientes con periodontitis. La producción de citoquinas en los tejidos periodontales ha sido sujeto a varias investigaciones entre otras han sido reportadas por Haynes y Geivelis. Se han empleado diferentes técnicas de inmuno histoquímica tal como lo describen los reportes con la técnica de Elisa de sobrenadante de tejidos periodontales homogenizados -

Cuantificación de proteínas a partir de tejidos

Para detectar y cuantificar sustancias en los tejidos se requiere que las moléculas que se van a analizar estén en solución acuosa o en un solvente sobre lípidos, si son de naturaleza lipídica; cuando las sustancias a estudiar están en un medio biológico líquido como el plasma sanguíneo, se simplifica el trabajo de la preparación porque las moléculas están disueltas. Por el contrario si las sustancias no están en solución, es indispensable extraerlas; sí la molécula está muy ligada a la estructura celular, es necesario separarla por medio de una solución detergente, la más usada es el Tritón x-100 utilizado para solubilizar tejidos en los cuales se quiere detectar proteínas por métodos de Inmuno Ensayo como el de ELISA 10.
Entre las técnicas mas usadas en la detección de tejidos se pueden mencionar las siguientes:
Cromatográficas, Electroforéticas, Inmunológicas como: Inmunofluorecencia, Inmunoelectroforesis Anticuerpos monoclonales Anticuerpos policlonales y su posterior detección por el método de ELISA o del Inmunodott.
Anticuerpos monoclonales: Es una de las técnicas Inmunológicas más usadas en la detección y caracterización de sustancias y se basa en las propiedades de combinación entre “antígeno-anticuerpo” para que se dé esta combinación se requieren dos principios fundamentales:
a. Una célula (linfocito B) produce anticuerpos específicos para cada antígeno, de acuerdo con la teoría de la selección clonal de Burnet.
b. Se requiere hibridización de células productoras de anticuerpos, con células de mieloma para generar hibridomas en los que haya secreción de un anticuerpo con el crecimiento continuo. Una posterior selección y clonaje de las células híbridas permite la derivación de anticuerpos monoclonales de una especificidad predefinida y con actividad deseada
Anticuerpos Policlonales: Es otra técnica usada para la cuantificación de sustancias, basada también en la combinación entre antígeno y anticuerpo, los anticuerpos policlonales son obtenidos de suero de animales previamente inmunizados con el antígeno que se va a cuantificar. La obtención de anticuerpos policlonales se fundamenta en el principio : el sistema inmune de los mamíferos, cuando es estimulado por la presencia de un antígeno sintetiza anticuerpos específicos contra éste, los cuales van a estar en altas concentraciones en el plasma; para que se produzca un anticuerpo específico por esta técnica, lo ideal es utilizar el antígeno puro para inmunizar el animal (conejo) con lo cual se logra una mayor especificidad.

El método de ELISA (ENZIME LINKED INMUNO SORBENT ASSAY)

Es un sistema bastante exacto para medir las sustancias como las citoquinas, se fundamenta en la captura de la citoquina presente en la muestra por anticuerpos anti citoquinas, es un método inmuno enzimático en fase sólida para antígenos solubles es mas utilizado por su sensibilidad, sencillez y rapidez. Esta prueba se basa en la capacidad que tiene la placa de micro titulación de adherir fuertemente las proteínas, pudiendo en cada pozo adherir nanogramos de proteína. Los anticuerpos( del suero en Ac policlonales ) reaccionarán con el antígeno adherido a los pozos y esta unión se revelará con un segundo anticuerpo o a la proteína A marcados con una enzima, las mas usadas son: la Fosfatasa alcalina y la peroxidasa. El grado de unión del anticuerpo se evalúa midiendo el color desarrollado luego de la adición del sustrato y cromógeno correspondientes al sistema; el nivel de color presente es proporcional al nivel de enzima unido al anticuerpo. Para la medición del color se emplean detectores automáticos que permiten la lectura, registro y tabulación de los resultados de los pozos.

METODO

Se realizó un estudio descriptivo donde se midió la concentración de IL-6 de los tejidos periodontales de los sujetos de estudio y se correlacionó el comportamiento de la IL-6 en tejidos periodontales de pacientes clínicamente sanos ,con gingivitis y con periodontitis mediante el T de Student y la prueba U De Mann-Whitney
Sujetos:
Se seleccionaron 35 pacientes, Mujeres 22 y Hombres 13, con edades comprendidas entre los 24 y los 58 años de la clínica de postgrado de Rehabilitación Oral de la Facultad de Odontología de la Universidad Nacional de Colombia, los pacientes se dividieron en tres grupos de los cuales 13 eran clínicamente sanos, 13 con gingivitis y 9 con periodontitis crónica. Se excluyeron del estudio los pacientes con factor de riesgo de endocarditis bacteriana, soplo valvular, intervención quirúrgica cardiaca, pacientes con prótesis valvulares antecedentes de artritis reumatoide aguda. Pacientes con factor de riesgo relacionado con inmunodeficiencia, enfermedades óseas metabólicas o articulares; sujetos con antecedentes de enfermedades infecciosas como hepatitis B, hepatitis C, tuberculosis, enfermedades endocrinas, tumores. Pacientes con tratamiento específico farmacológico de antimicóticos, quimioterapia, anti-inflamatorios, anticoagulantes, hormonas. Pacientes con antecedentes de cáncer que hubiesen sufrido irradiación, especialmente cérvico facial; pacientes con patologías sistémicas como nefropatías, diabetes entre otras. Se incluyeron en el estudio pacientes con periodonto clínicamente sano, pacientes con gingivitis con cirugía pre-protésica contemplada dentro de su plan de tratamiento y pacientes con periodontitis que tuvieran en su plan de tratamiento procedimientos de cirugía periodontal

Procedimiento:

Se realizó la secuencia clínica en los tres grupos de pacientes: Exámen clínico: Se consignaron los datos de: Edad , sexo, GB sangrado gingival, PPD profundidad de los surcos gingivales, PLA Prueba de los niveles clínicos de inserción. Análisis radiográfico por medio de radiografía periapical Cada paciente firmó el consentimiento informado de la Universidad Nacional para la clínica de cirugía: Se hizo con cada sujeto la motivación y enseñanza acerca de las técnicas de higiene oral, raspaje y alisado radicular un mes antes de la toma de la muestra y se realizó el pulido coronal una semana antes del procedimiento.
Toma de la muestra:
Para la toma de las muestras se siguió en todos los casos el protocolo siguiente:
Preparación del campo operatorio Desinfección externa cutánea del paciente. Colocación de campos operatorios estériles. Desinfección endo-bucal mucosa. Anestesia local diseño del colgajo mucoperióstico Toma de la muestra según Keiso Takahashi . Prescripción y control post-operatorio Una vez tomada la muestra se colocó en un vial estéril con PBS y se congeló en un a nevera a –70 grados centígrados en el Instituto de Biotecnología, hasta el procesamiento de todas las muestras.
Procesamiento de la muestra:
Se realizó esta fase en el laboratorio del “Instituto de Salud en el Trópico de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Colombia y en el Instituto Nacional de Salud. Se siguió el procedimiento como se describe a continuación:
Descongelar las muestras a temperatura ambiente. Homogenizar el tejido en un homogenizador en la solución de la muestra. Colocar en un tubo de centrífuga en frío. Sonicar a 20 Kz durante 15 segundos. Centrifugar a 12.000 RPM durante 10 minutos a 4 grados centígrados. Separar en viales el sobrenadante para su uso. En el sobrenadante determinar la concentración de la IL-6. Se prepararon los reactivos del Kit de Elisa Kine Human Interleukin 6 según las recomendaciones del laboratorio Quimiolab así :
- Primero: el anticuerpo Policlonal anti IL6 h en conejo. Se agita el frasco de diluyente de ensayo. Se recupera el anticuerpo policlonal anti IL6 con 3.5 ml de diluyente y se agita de nuevo.
- Segundo: se prepara el Estándar o patrón de IL6. Se hacen las diluciones seriadas de IL6 estándar. Se marcan 5 tubos de 12x 75 del 0 al 4. Se agrega 950 ul de diluyente para el tubo No1.Para los tubos remanentes No2-4 y el 0. Se agregan 750 ul del mismo diluyente. Se recupera el estándar de IL6 liofilizado con 1000 ul del diluyente de ensayo. Se agita esta solución tiene una concentración de 10.000 pg/ml. Se toman 50 ul del patrón del estándar de IL6 recuperado del vial. Se agrega al tubo No 1, este tiene una concentración de 500 pg/ml. Los estándar 2-4 se preparan haciendo una dilución 1:4 del estándar precedente, como se aprecia en la figura No 1 En el tubo 0 no se agrega ningún estándar de IL6.
- Tercero: se diluye el Buffer de lavado. Se diluye el Buffer de lavado en agua deshionizada a 1 L.
- Cuarto: Se recupera el conjugado Fosfatasa alcalina anticonejo en cabra. Se recupera el conjugado con 6ml de diluyente de ensayo y se agita.
- Quinto: Se prepara el reactivo de color de acuerdo a la cantidad de pozos (200 ul por pozo) del reactivo A Y B volumen a volumen 1:1.Preparar en tubo de centrífuga con tapa y mezclar
Luego se hace el procedimiento de Ensayo así: Colocar 100 µl del sobrenadante (homogenizado del tejido) en los pozos. Agregar 25 µl de anticuerpo policlonal IL-6 en conejo en cada pozo. Sellar la placa de los pozos con acetato para evitar evaporación Incubar 3 horas a temperatura ambiente. Lavar 5 veces la placa con pipeta multicanal. Agregar 250 µl de Buffer de lavado. Removerlo e invertir la placa. Secar con papel absorbente. Agregar de nuevo Buffer de lavado con pipeta multicanal. Repetir la acción 4 veces. Dispensar Buffer de lavado por quinta vez. Dejar el Buffer de lavado 10 minutos a temperatura ambiente. Secar bien los pozos. Agregar 50 µl de conjugado en cada pozo.
Sellar la placa. Incubar la placa 45 minutos a temperatura ambiente. Retirar el papel sellante. Lavar 5 veces con Buffer de lavado. El último lavado dejar 10 minutos con Buffer de lavado. Eliminar y secar. Agregar 200 µl de reactivo de color. Sellar la placa. Incubar 15 minutos a temperatura ambiente. Leer a 492 mm, cuando se lee el estándar monitorear el color hasta que dé 1.6 de Do. Parar la reacción con 50 µl de H2SO4 0,5 M. Leer en el colorímetro a 492 nm .Hacer la curva en papel milimetrado para leer las muestras

RESULTADOS
Los resultados obtenidos de la mediciones y de las concentraciones de IL6 de los tejidos periodontales se contemplan en la Figura No 1 donde se consignaron los datos correspondientes de los pacientes del estudio. Número correspondió al número de la muestra, sexo: 0 hombres y mujeres:1. GB a la presencia: 1 y ausencia. 0 de sangrado gingival; PPD profundidad del surco gingival en mm, PLA niveles clínicos de inserción en mm. Dx al diagnóstico donde O es normal, 1 gingivitis ,2 periodontitis. Dx radiográfico . No pérdida ósea: 0 pérdida ósea leve:1 pérdida ósea moderada 2, pérdida ósea severa 3 ABSOR a la concentración de IL6 en pg/ml.

Figura No 1 .En esta tabla se muestran los datos obtenidos de los pacientes del estudio

Número correspondió al número de la muestra, sexo 0 hombres 1 mujeres,   GB a la presencia 1 ausencia de sangrado gingival 0, PPD profundidad del surco gingival en mm, PLA niveles clínicos de inserción en mm Dx  al diagnóstico O normal 1 gingivitis 2 periodontitis. Dx radiográfico.0 No pérdida ósea,  1 pérdida ósea leve, 2 pérdida ósea moderada ABSOR  a la concentración de IL6 en pg/ml

Pruebas estadísticas
De los pacientes que participaron en el estudio el 63% eran mujeres y 37 % hombres como se puede apreciar en la figura No 2.

Figura No 2 corresponde los pacientes que participaron en el estudio 63% eran mujeres y 37 % hombres

Por otra parte eran en su mayoría mayores de 50 años, con una media de 44 años y una desviación estándar de 10 años. El histograma de frecuencias de está variable se puede observar en la figura No 3 donde se mostró que el 66% de los pacientes que participaron en el estudio presentaban sangrado gingival.

Figura No3 El 66% de los pacientes presentraon sangrado gingival y en un 34% de los casos no presentaban sangrado.

El 34% de los pacientes que no presentaban sangrado tuvieron un diagnostico normal.
¿Existe diferencias entre las medias de las proporciones de Absorbancia de IL6  de los tres grupos de pacientes?
Se utilizó la prueba t de Student para responder está pregunta. Se compararon las medias de los niveles de ABSORBANCIA entre los pacientes normales y los pacientes con gingivitis, entre los pacientes normales y los pacientes con periodontitis, y finalmente entre los pacientes con gingivitis y los pacientes con periodontitis.

Los resultados de está prueba fueron los siguientes:

La decisión es rechazar la hipótesis nula debido a que t = -7.068 (p<0.0000003) es menos que t0.25=-2,064 para 24 grados de libertad.
Con la prueba de t Student se encontró diferencia significativa entre el nivel de absorbancia de las muestras de pacientes con gingivitis y pacientes con encías normales.

La decisión es rechazar la hipótesis nula debido a que t = -5.8201 (p<0.00001) es menos que t0.25=-2,086 para 20 grados de libertad.
Para los pacientes normales y pacientes con periodontitis los niveles de absorbancia  presentaron una diferencia significativa con la prueba de t de Student. 

La decisión es rechazar la hipótesis nula debido a que t = -4.748 (p<0.0001) es menos que t0.25=-2,086 para 20 grados de libertad.
Al realizar la correlación entre los niveles de absorbancia entre los pacientes con gingivitis y con periodontitis se encontró diferencia significativa donde  p<0.0001

¿Existe diferencias entre las proporciones de ABSOR  de los tres grupos de pacientes?
Se utilizó la prueba U de Mann – Whitney para responder está pregunta. Se compararon los niveles de ABSOR entre los pacientes normales y los pacientes con gingivitis, entre los pacientes normales y los pacientes con periodontitis, y finalmente entre los pacientes con gingivitis y los pacientes con periodontitis.
Ambas pruebas (t de Student y la prueba U de Mann – Whitney) mostraron que existen diferencias significativas entre las proporciones de ABSOR de los tres grupos a un nivel de significancia del 0.95.

Resultados Prueba U de Mann – Whitney

La decisión es rechazar la hipótesis nula debido a que z = 4,333  (p<0,000007) es mayor que z95=1.96 que corresponde al valor crítico para un nivel de significancia del 95%.

La decisión es rechazar la hipótesis nula debido a que z = 3,9065 (p<0,00005) es mayor que z95=1.96 que corresponde al valor crítico para un nivel de significancia del 95%.

La decisión es rechazar la hipótesis nula debido a que z = 3,90650 (p<0,00005) es mayor que z95=1.96 que corresponde al valor crítico para un nivel de significancia del 95%.

Resumiendo el p – valor obtenido en cada una de los grupos en cada prueba fueron los siguientes:

¿La pérdida ósea está correlacionada con los niveles de Absorbancia de IL6 en los pacientes con periodontitis?
Para establecer está correlación de rangos de Spearman.

H0 = No existe asociación entre la pérdida ósea y los niveles de ABSOR.
Ha = Sí existe asociación entre la pérdida ósea y los niveles de ABSOR.

El valor crítico para la prueba  de correlación de rangos de Spearman, con un nivel de significancia del 95% y n=9 es 0.683 (p<0.005). Por lo tanto se rechaza la hipótesis de que no existe correlación entre los rangos de la pérdida ósea y los niveles de Absorbancia de IL6.¿La profundidad de los defectos periodontales está correlacionada con los niveles de Absorbancia para IL6 de los pacientes con gingivitis y los pacientes con periodontitis?
Para ellos se utilizó el coeficiente de correlación de rangos de Spearman.
H0 = No existe asociación entre los rangos de los defectos periodontales y los niveles de Absorbancia de IL6
Ha = Sí existe asociación entre los rangos de los defectos periodontales y los niveles de Absorbancia de IL6

El valor crítico para la prueba  de correlación de rangos de Spearman, con un nivel de significancia del 95% y n=22 es 0.428 (p<0.0025). Por lo tanto se rechaza la hipótesis de que no existe correlación entre los rangos de las variables profundidad de los defectos periodontales y los niveles de Absorbancia de IL6.
¿Los niveles clínicos de inserción están correlacionados con los niveles de Absorbancia de IL6 de los pacientes con gingivitis y los pacientes con periodontitis?
Para ellos se utilizó el coeficiente de correlación de rangos de Spearman.
H0 = No existe asociación entre los rangos de los niveles clínicos de inserción y los niveles de ABSOR.
Ha = Sí existe asociación entre los rangos de los niveles clínicos de inserción y los niveles de ABSOR.

El valor crítico para la prueba la prueba de correlación de rangos de Spearman, con un nivel de significancia del 95% y n=22 es 0.428. Por lo tanto se rechaza la hipótesis de que no existe correlación entre los niveles clínicos de inserción y los niveles de Absorbancia de IL6.

DISCUSIÓN

Los resultados obtenidos en este trabajo mostraron que existe diferencia entre los niveles de IL-6 entre las diferentes muestras de tejidos tomados de pacientes con encía clínicamente sana con gingivitis y con  periodontitis; estos resultados concuerdan con el trabajo realizado por Mc Gee donde se analizaron las concentraciones de IL-6 IL-8 IL-1 de fluido crevicular y de biopsias de tejidos gingivales. La inflamación gingival se inicia cuando las endotoxinas de LPS (lipopolisacáridos) de las bacterias específicas relacionadas con la patogénesis de la enfermedad periodontal inducen a las células productoras de citoquinas  como macrófagos, fibroblastos, células endoteliales etc,  a la síntesis de citoquinas. Se ha demostrado que a medida que se evidencia el progreso de la enfermedad periodontal se incrementan los niveles de IL-6 ya que modula el recambio del colágeno y participa en los mecanismos de resorción ósea.
En este estudio se correlacionó la profundidad de los defectos (PPD) periodontales con la concentración de IL-6 de los tejidos sanos,  con gingivitis y con periodontitis, se encontró que cuando aumenta la profundidad  de los defectos se incrementan los niveles de IL-6 de los tejidos la correlación según la prueba de Spearman mostró una significancia de 95% como lo mostró Johnson en su estudio
 Se planteó la PPD como indicador de riesgo de progresión de la periodontitis por lo tanto los mecanismos biológicos se disparan de manera significativa como es el caso de la IL-6 donde se compararon las concentraciones en tres diferentes estados de inflamación y se obtuvo una diferencia significativa entre los tres grupos de pacientes  estudiados, así lo demuestran los trabajos de Johnson y McGee, al comparar tres citoquinas en tejidos periodontales, en el caso de la IL-6 la diferencia fue altamente significativa (P<0.0003) y en este trabajo la diferencia también es significativa al comparar concentración de Il6 en tejidos sanos y en tejidos con periodontitis (P<0.00005).
Al comparar la profundidad de los defectos periodontales y correlacionarlos con la concentración de IL6 de los tejidos se observó que los tejidos correspondientes a profundidad mayor la concentración de IL6 era mayor como lo reporta Takahashi,  por ser la IL6 un potente mediador de la inflamación que participa en la diferenciación de los linfocitos B y la proliferación de linfocitos T , lo que indica que la IL6 participa en la progresión de la periodontitis, los resultados obtenidos en el presente trabajo corresponden a P<0.000005 lo que corresponde a una diferencia altamente significativa entre la profundidad de los defectos y la absorbancia de los tejidos periodontales con periodontitis presentan una mayor profundidad de los defectos
Cuando la profundidad de los defectos >6mm las concentraciones de Il6 fueron mayores como lo reportan los trabajos de Stachenko, Guillot y Reinhradt las concentraciones de IL6 de sitios<6mm  en este trabajo comparado con los sitios < 3mm  fueron altamente significativos (P<0.0001)-
Los niveles de IL-6 en inflamación gingival reportados por Atilla fueron significativamente mayores comparando los tejidos de pacientes con y sin gingivitis al igual que lo que se mostró en este trabajo al comparar encía sana con encía con gingivitis. En este trabajo al comparar la absorbancia de tejidos sanos y con gingivitis se encontró una diferencia significativa (P<0.000007)-
 Myrillas reportó al igual que este trabajo que los niveles de IL6 de tejidos inflamados fueron significativamente mayores que los tejidos de sitios sanos  clínicamente
(P< 0.000007)
Así como la IL6 juega un papel importante en los procesos inflamatorios como la respuesta a la injuria bacteriana por activación de las células B y la proliferación de células T la concentración de esta interleuquina se encuentra con mayores niveles que en tejidos sanos como lo mostró Nagay 
La actividad periodontal en pacientes con periodontitis se relaciona con los niveles clínicos de inserción, en este trabajo se correlacionó con la concentración de IL6 con la pérdida de niveles de inserción,  esta correspondió al 95%, con una diferencia significativa encontrada al comparar la absorbancia entre tejidos normales y con periodontitis (P<00001) en periodontitis se ha demostrado que la IL-1ß y la IL-6 los niveles se incrementan durante el progreso de la enfermedad por tener un acción sinérgica, en el trabajo de Socransky y Stashenko al medir la concentración de IL-1ß de tejidos periodontales y observar mayor concentración  en los tejidos con periodontitis comparados con tejidos sanos el estudio indicó que la actividad periodontal se podría medir con la concentración de las citoquinas
Partiendo de la hipótesis  que los fibroblastos  de tejidos inflamados contribuyen a la patogénesis de la enfermedad periodontal por la síntesis de citoquinas en estos procesos Bagtzoglu y Ebersole estimularon in vitro a estas células y encontraron  una fuerte correlación positiva con la secreción de IL-6 por los  fibroblastos in vitro indicando que in vivo se da la expresión en espejo de esta actividad y demostraron que los cultivos de tejidos inflamados tenían una gran capacidad de síntesis

En este estudio se midió la concentración de IL-6 de los tejidos periodontales por medio del análisis inmuno sorbente ligado a la enzima ELISA y se observó la presencia de la IL-6, la distribución de frecuencias  relativas entre los niveles de absorbancia de los pacientes  correspondio al 95% comparando los pacientes sanos y los pacientes con gingivitis.
Se observó que hay una diferencia significativa al comparar los valores de absorbancia de IL6 de tejidos sanos y de tejidos con gingivitis (P<0.0000003) de igual manera se observó un diferencia significativa al comparar la absorbancia de IL6 de tejidos sanos con tejidos de pacientes con periodontitis (P<0.0001) Al analizar y comparar la absorbancia de IL6 de los tejidos con gingivitis y de los tejidos de pacientes con periodontitis se obtuvo un valor de P<0.001que corresponde a una diferencia significativa en cuanto  a la absorbancia de IL-6.
Se confirma la hipótesis del estudio al resolver la pregunta de si ¿existe diferencia entre las proporciones de absorbancia de los tres grupos de pacientes? para este efecto se utilizaron las dos pruebas estadísticas la t de Student y la prueba de U Mann-Whitney para responderla se compararon  los niveles de Absorbancia entre los pacientes normales con gingivitis y pacientes normales con periodontitis, ambas pruebas mostraron que existen diferencias significativas entre las proporciones de absorbancia de IL-6 de los pacientes sanos, con gingivitis y con periodontitis a un nivel de significancia del 0.95%. El 66% de los pacientes que participaron en el estudio presentaron sangrado gingival en 34% que correspondía a los pacientes sanos no presentaron sangrado gingival.
Los pacientes con profundidad de los defectos  PPD >O = 6 mm presentaron mayor concentración en los niveles de IL-6 comparados con los pacientes sanos con profundidad menor a 3mm.
Los pacientes con pérdida de los niveles clínicos de inserción los > o = 6mm  presentaron mayor concentración de los niveles de IL-6   que los tejidos de los pacientes sanos y con gingivitis.