OBJETIVO: Determinar si existe diferencia en la expresión y localización de MMP-13 en periodonto sano, agrandamiento gingival inducido por placa bacteriana, periodontitis crónica moderada/avanzada y periodontitis agresiva, mediante inmunohistoquímica para evidenciar un posible papel de ésta colagenasa en la progresión del daño tisular en patologías infecciosas del periodonto.

METODOS: El tipo de diseño seguido en este estudio fue observacional comparativo. Se tomaron biopsias de 22 pacientes, que fueron diagnosticados como 5 sanos (S), 6 Periodontitis crónica (PC), 6 Periodontitis agresiva (PA), y 5 Agrandamiento gingival inducido por placa bacteriana (AGIPB), analizándose 4 estratos tisulares en cada biopsia. Epitelio oral (EO), epitelio de unión (EU), conectivo adyacente al epitelio de unión (CAEU) y conectivo profundo (CP). El tipo de muestreo fue intencional, ya que los investigadores conocían las características de los sujetos que se escogieron para el estudio.

Las muestras se colocaron en formalina al 10% y se incluyeron en bloques de parafina, para posteriormente realizar la técnica de inmuhistoquímica. Se hizo valoración semi-cuantitativa determinada por conteo celular al microscopio de luz (40x).

RESULTADOS: La mayor expresión de MMP-13 se da en la periodontitis crónica (PC) seguida por el agrandamiento gingival inducido por placa bacteriana (AGIPB), periodontitis agresiva (PA) y finalmente los pacientes sanos que no mostraron expresión alguna de ésta colagenasa.

El estrato tisular que más expresión mostró fue el epitelio oral a nivel del estrato granuloso.

CONCLUSIÓN:

La MMP-13 no se expresa en biopsias de tejido sano. La expresión se presenta en tejidos que se encuentren en procesos de destrucción o de remodelación.

PALABRAS CLAVES: Metalloproteinase-13 (MMP-13), collagenase-3, periodontal disease, metalloproteinase, immunohistochemistry.

AREA TEMÁTICA: Periodoncia

INTRODUCCION

Los procesos inflamatorios e inmunes actúan en los tejidos gingivales para protegerlos contra el ataque microbiano evitando la proliferación y extensión microbiana. Esta secuencia de eventos generalmente inicia cuando bacterias Gram negativas liberan vesículas que contienen lipopolisacaridos que estimulan la liberación de citoquinas. Las citoquinas activan células normales, como fibroblastos y células epiteliales que posteriormente producen prostaglandinas que inducen resorción ósea, y metaloproteinasas de la matriz (MMPs) que destruyen el tejido conectivo. 1

La matriz extracelular del tejido periodontal, esta compuesta por proteoglicanos, fibronectina y especialmente colágeno. 2 Las fibras colágenas insertadas en la superficie radicular, parecen ser el blanco de la degradación en la periodontitis, siendo las MMPs las principales responsables de esta degradación. 3

Las MMPs son una familia de endopeptidasas zinc y calcio dependiente, que comparten características estructurales básicas pero difieren en su estructura primaria y en la especificidad del sustrato. 4 Juegan un papel no solo en procesos patológicos como enfermedad periodontal, artritis, cáncer, aterosclerosis, diabetes, enfisema pulmonar y osteoporosis; Si no que también en eventos fisiológicos como el desarrollo embriológico, la erupción de dientes, involución del útero post parto, remodelación del tejido, morfogénesis de glándulas salivales, y la cicatrización de heridas. 2,5,6

Estas enzimas son sintetizadas y secretadas por una variedad de células como leucocitos polimorfonucleares (PMN), macrófagos, fibroblastos, queratinocitos, osteoclastos y células epiteliales y endoteliales, que funcionan en un pH neutro y que utilizan varios constituyentes de la matriz extracelular como sustratos. 2,4,7,8 Estas células también producen los inhibidores tisulares de las MMPs, (TIMPs) los cuales juegan un papel importante en los procesos de enfermedad periodontal, ya que se sugiere que el balance entre éstas y sus inhibidores, puede estar ampliamente asociados con el estado clínico de la enfermedad.

Las MMPs se dividen en cuatro subclases: 1.COLAGENASAS INTERSTICIALES: MMP-1 o colagenasa 1 o tipo fibroblástica; MMP-8 o colagenasa 2 o tipo neutrófila; MMP-13 o colagenasa-3; MMP-18 o colagenasa- 4. 2. GELATINASAS (colagenasas tipo IV): MMP-2 o gelatinasa A; MMP-9 o gelatinasa B. 3. ESTROMELISINAS: MMP-3 o estromelisina 1;MMP-10 o estromelisina 2; MMP-11 o estromelisina 3; MMP-7 o matrilisina. 4. METALOPROTEINASAS DE MEMBRANA: MMP-14; MMP-15; MMP-16; MMP-17; MMP-MT1; MMP-12 o metaloelastasa; MMP-19; MMP-20 o enamelisina. 3,5,9

La evidencia de que las MMPs están involucradas en la destrucción tisular de la enfermedad periodontal humana ha sido reunida por Birkedal- Hansen e incluye lo siguiente: 1) células aisladas de encía normal e inflamada son capaces de expresar una amplia variedad de MMPs en cultivos. 2) Varias MMPs pueden ser detectadas en encía in vivo 3) la MMP-8 y la MMP- 13 son realmente detectadas en el fluido gingival crevicular (FGC) de pacientes con gingivitis y periodontitis.

Las colagenasas son enzimas capaces de iniciar bajo condiciones fisiológicas la degradación de la molécula de colágeno tipo I y tipo III,(10) proteína dominante de la matriz del tendón, ligamento, encía, esclera y dermis. Se ha intentado localizar la producción de colagenasas con estudios de inmunolocalización en biopsias gingivales de pacientes con enfermedad periodontal no tratada, y estos estudios confirma que las enzimas estuvieron fuertemente asociadas con células inflamatorias. 6

Se ha demostrado que durante la inflamación crónica hay expresión de MMP-13 en el epitelio de la bolsa periodontal que invade el tejido conectivo subyacente. Por ésta razón se ha propuesto que la MMP-13 tiene un papel importante en la degradación de la matriz colágena en mucosa inflamatoria crónica. 7 Además se ha mostrado que esta MMP es producida tanto por células epiteliales y mesenquimales en tejido conectivo inflamado, en remodelación y en sitios de cicatrización. 11 Como se ha mencionado, durante la periodontitis activa, la degradación del colágeno gingival se debe en parte a las MMPs expresadas in situ por células inflamatorias y células residentes. El balance entre las MMPs y los TIMPs controlan el remodelado de la matriz extracelular, y una disrupción en el balance de las MMPs-TIMPs, generará procesos patológicos. 11 Se ha establecido una relación entre la degradación de colágeno durante la Periodontitis avanzada, y el balance de las MMPs y los TIMPs, pero no existe evidencia de la relación entre diferentes estados patológicos del periodonto, diferentes a la periodontitis crónica y la expresión de colagenasas de amplio espectro como la MMP- 13 y tampoco es claro que tipos celulares expresan esta enzima en las diferentes patologías. Es por esto, que se plantea la realización de éste estudio descriptivo comparativo, cuyo objetivo es cuantificar y localizar la expresión de MMP-13 en epitelio oral, epitelio de unión/ epitelio sulcular o de la bolsa, conectivo adyacente al epitelio de unión y conectivo profundo de biopsias gingivales de pacientes con periodontitis crónica moderada/avanzada, periodontitis agresiva, agrandamiento gingival y pacientes sanos.

MATERIALES Y MÉTODOS

Se realizó un estudio observacional, comparativo. La Población (N) fueron los pacientes atendidos en el Posgrado de Periodoncia y pregrado, de la Facultad de Odontología de la Pontificia Universidad Javeriana con diagnósticos de periodontitis crónica moderada/avanzada, periodontitis agresiva, agrandamiento gingival, y sitios sanos. La muestra (n) consistía en 22 pacientes, que fueron diagnosticados como 5 sanos, 6 con periodontitis crónica moderada 6 con periodontitis agresiva y 5 con agrandamiento gingival. Con un promedio 28,68 y un rango de edad entre ( 14 a 48 años). El tipo de muestreo fue intencional, ya que los investigadores conocían las características de los sujetos que se escogieron para el estudio.

Los criterios de inclusión para los sitios sanos fueron: surco 0.5mm - 3 mm, ausencia de hemorragia, ausencia de bolsa periodontal. Para los sitios con periodontitis crónica moderada-avanzada: hemorragia al sondaje, nivel de inserción > 5 , bolsa periodontal > 5. Para los sitios con periodontitis agresiva: hemorragia al sondaje, historia familiar, cantidad de placa inconsistente con pérdida en los niveles de inserción, presencia de bolsas profundas; y para los sitios con agrandamiento gingival: hemorragia al sondaje, y seudobolsas. Se excluyeron los pacientes con compromisos sistémicos, fumadores, mujeres embarazadas, pacientes que hubieran recibido tratamiento periodontal 6 meses antes del estudio; y pacientes con tratamiento de corticoesteroides y antibióticos 6 meses antes del estudio.

La prueba se realizó en la Clínica de Postgrado de Periodoncia de la Facultad de Odontología de la Pontificia Universidad Javeriana, se seleccionaron los pacientes dentro de los parámetros de inclusión y exclusión preestablecidos. Se diligenció un documento de consentimiento informado por parte del paciente, y se procedió a la toma de la biopsia.

Las biopsias se tomaron bajo anestesia local (lidocaina 2% con epinefrina 1:80000), utilizando el siguiente procedimiento:

Se realizaron incisiones a bisel interno, obteniendo un bisel de tejido gingival, que fue inmediatamente colocado en formalina al 10% e incluidos en bloques de parafina, y se procedió a realizar la técnica de inmunohistoquímica.

 Inmunohistoquímica

Se procedió a desparafinizar las placas a 60°C y posteriormente fueron hidratadas con xilol y alcoholes a diferentes concentraciones. Se lavó con buffer TBS a un pH de 8.0 con tween al 0.05% (TTBS). Luego se procedió a recuperar los antígenos a través de una inducción al calor con EDTA a un pH 9.0 y posterior a un acondicionamiento de los tejidos con buffer citrato se aplicó peróxido de hidrógeno al 3% para así lograr bloquear la peroxidasa endógena. El marcaje de la MMP-13 en los tejidos se hizo con el anticuerpo monoclonal de ratón MMP-13 (Collagenase- 3) Ab-1 (Clone VIII A2) de NeoMarkers.

Posterior al bloqueo con suero normal de caballo (normal horse serum), se incubaron las muestras con anticuerpos monoclonales anti-MMP-13 de la marca NeoMarkers de LAB VISION corporation, durante toda la noche a temperatura ambiente. Como anticuerpo secundario se utilizó un anti-IgG de ratón conjugado con biotina. Luego de agregar el complejo streptavidina-peroxidasa, la reacción se reveló con el sustrato DAB. El contraste se hizo con hematoxilina y las placas se cubrieron con citorresina. Como control negativo se realizó el procedimiento de manera similar sin agregar el anticuerpo primario a las biopsias. Como control positivo se utilizó placenta la cual se colocó en cada placa.

Una vez corrida la prueba, se procedió a hacer la semicuantificación a través de microscopía de luz por conteo celular (40X). El observador fue ciego.

Análisis de la información

Se elaboró una base de datos en formato Excel para posterior exportación a formato .sav para procesamiento con el paquete estadístico S.P.S.S. versión 11.0 para Windows. Seguidamente se realizó un análisis descriptivo univariado con tablas y graficas, elaboradas con los estadígrafos de tendencia central y dispersión según el nivel de medición de las variables.

En segunda instancia, se procesó el análisis inferencial comparativo que permitió poner a prueba las hipótesis, se construyeron los intervalos del 95% de confianza para los promedios, para las variables numéricas y también se procesaron las técnicas no paramétricas de Kruskal-Wallis y U de Mann-Whitney basada en la transformación de rangos, para valorar las diferencias entre los grupos diagnósticos, ante la inaplicabilidad del modelo paramétrico. En estas pruebas para todos los efectos se tomó como criterio de significancia, una p £ 0.05.

Finalmente, se analizaron las diferencias intragrupo (intradiagnóstico) utilizando las prueba de Análisis de varianza de Fridman para comparar los niveles de expresión entre los distintas muestras epiteliales dentro de cada grupo diagnostico.

Se hace notar que quien realizó los cálculos y pruebas estadísticas de hipótesis, fue un bioestadístico independiente al grupo de investigación.

RESULTADOS

Para determinar la diferencia en la expresión y localización de MMP-13 en periodonto sano y en diferentes patologías periodontales, se analizaron biopsias gingivales con inmunohistoquímica con el propósito de evidenciar el posible papel de ésta colagenasa en la progresión del daño tisular. Las variables mencionadas en el estudio, se encuentran descritas en el diccionario de codificación en los anexos.

La expresión de MMP-13 se determinó por conteo celular, cuantificando el resultado en porcentajes en cada uno de los estratos tisulares. Los queratinocitos, las células plasmáticas y los fibroblastos maduros, presentaron marcación positiva en su citoplasma para la MMP-13. El promedio de expresión en cada estrato se estableció para los pacientes sanos, con agrandamiento gingival inducido por placa bacteriana y los diferentes tipos de periodontitis.

Descripción muestral

La muestra consistió en 22 pacientes, 12 hombres y 10 mujeres, con una edad promedio de 28.68 y un rango de edad de 14 a 68 años. En la tabla 1 se muestran tanto los pacientes sanos como con enfermedad periodontal y su respectivo porcentaje de área marcada para MMP-13, en los diferentes estratos tisulares. la MMP-13 no se expresó en ninguno de los estratos tisulares de las biopsias de pacientes sanos (tabla 2, gráfica 1).

En el epitelio oral la mayor expresión de MMP-13 se presentó en la periodontitis crónica y periodontitis agresiva; en el agrandamiento gingival inducido por placa bacteriana se observa una desviación alta que coincide con la amplitud de sus rangos de variabilidad.

A nivel del epitelio de unión, la mayor expresión de la MMP-13 fue en la periodontitis crónica, mientras que en el agrandamiento gingival inducido por placa bacteriana y periodontitis agresiva se comportaron de manera similar.

En el conectivo adyacente al epitelio de unión, la expresión de MMP-13 fue mayor en la periodontitis crónica, seguido por el agrandamiento gingival inducido por placa bacteriana y la periodontitis agresiva. A nivel del conectivo profundo, la periodontitis agresiva mostró menor expresión en relación con las demás patologías.

Análisis Intergrupo

Para realizar el análisis intergrupo, se utilizaron las técnicas no paramétricas de Kruskal-Wallis y U de Mann-Whitney, para valorar las diferencias entre los grupos diagnósticos. En estas pruebas para todos los efectos se tomó como criterio de significancia, una p £ 0.05.

Los resultados mostraron diferencias de expresión de MMP-13 al comparar las biopsias de las patologías contra las biopsias de pacientes sanos en los cuatro estratos tisulares. De esta manera, al comparar la expresión de MMP-13 de pacientes con agrandamiento gingival inducido por placa bacteriana contra la expresión de MMP-13 de los tejidos sanos, se observó mayor expresión de la MMP-13 en los 4 estratos tisulares.p £ 0.05.

Al comparar la expresión de MPP-13 en biopsias de tejido de pacientes con periodontitis crónica, contra los tejidos de individuos sanos, se observó que la expresión de MMP-13 en el tejido conectivo profundo no muestra diferencia estadísticamente significativa, es decir que la expresión de MMP a nivel de éste estrato es baja, mientras que en los otros tres estratos tisulares la expresión de la MMP-13 es alta (tablas 3,4,5).

Análisis intragrupo

Con el objeto de detallar el comportamiento de la MMP-13 se hizo un análisis de su expresión dentro de cada grupo, esto se realizó a través de la prueba de análisis varianza de Friedman.

Al analizar el grupo en conjunto se encontraron diferencias significativas con p £ 0.001 indicando que el nivel de expresión de la MMP-13 cambia según el estrato tisular, siendo el promedio superior en el epitelio oral y el inferior en el conectivo adyacente al epitelio de unión y el conectivo profundo (gráfica 2, tabla 6).

En los tejidos de pacientes con agrandamiento gingival inducido por placa bacteriana la MMP-13 tuvo mayor expresión a nivel del epitelio oral, y la menor expresión de la MMP- fue a nivel del tejido conectivo adyacente al epitelio de unión. Sin embargo la diferencia de expresión en estos cuatro grupos no alcanzó a ser estadísticamente significativa (p £ .0.88).

En los tejidos de pacientes con periodontitis crónica, la expresión de MMP- 13 a nivel del epitelio oral fue del 100%, y aunque los rangos de diferencia eran relativamente amplios los tejidos conectivos tendían a comportarse al igual que los epitelio de una forma semejante, con una p= 0.007.

Finalmente en las periodontitis agresivas, se observó un compartimiento muy similar a nivel de los conectivos, una expresión con un rango de variabilidad amplio a nivel del epitelio de unión y una expresión del 100% en el epitelio oral, estableciéndose de ésta forma una diferencia estadísticamente significativa de la expresión de la MMP-13 a nivel de los 4 estratos tisulares (gráfica 3, tabla 7).

DISCUSIÓN

En condiciones patológicas como la enfermedad periodontal, ocurre destrucción acelerada de tejido conectivo, que puede considerarse como un fracaso en los mecanismos reguladores fisiológicos. 7 Una vez los procesos inmunes e inflamatorios se inician, diversas moléculas inflamatorias como las metaloproteinasas, citoquinas, prostaglandinas y enzimas son liberadas por los leucocitos y fibroblastos o células estructurales de los tejidos. Las proteasas tienden a degradar la estructura del colágeno de los tejidos y por lo tanto, crean espacios para la posterior infiltración de leucocitos, por lo que los tejidos periodontales se muestran pobremente adaptados al diente, inflamados y dilatados . Las MMPs llamadas también colagenasas, son sintetizadas principalmente por las células del tejido conectivo, sin embargo, células hematopoyéticas (monocitos y macrófagos) queratinocitos, células endoteliales, células plasmáticas y muchos tipos de células tumorales, también las producen. 1 3

La MMP-13 ha mostrado tener amplia especificidad por el sustrato colágeno, en comparación con otras MMPs, esto probablemente debido a que su expresión fisiológica en humanos, se limita a situaciones de rápido recambio de colágeno fibrilar. También ha mostrado que durante la inflamación crónica hay expresión de MMP-13 en el epitelio de la bolsa periodontal que invade el tejido conectivo subyacente. Es por ésta razón que se ha propuesto que la MMP-13, tiene un papel importante en la degradación de la matriz colágena en tejido inflamatorio crónico. 7

Las células epiteliales normales tienen la capacidad de expresar MMP-13 durante la inflamación. 14 Tal expresión se presenta en las células suprabasales y basales de las interdigitaciones epiteliales que se expanden dentro del tejido conectivo. Sin embargo, el patrón de expresión de MMP-13 en encía inflamada sugiere que su expresión se relaciona con un estado específico de activación de las células epiteliales y que la vecindad de células inflamatorias no es necesaria para inducir la expresión de esta colagenasa por células epiteliales periodontales. 7

Al hacer el análisis de la inmunohistoquímica al microscopio de luz (40X), las células positivas para la MMP-13 en el epitelio oral, se encontraban específicamente en el estrato granuloso; también se observaron escasos fibroblastos maduros, y células plasmáticas en el tejido conectivo. Por su parte Tervahartiala y col en el 2000 describieron la expresión de MMP-13 en macrófagos y fibroblastos, en biopsias gingivales de pacientes con enfermedad periodontal. Finalmente Kiili y col, en 2002 detectaron la expresión de MMP-13 en el epitelio del surco y en células parecidas a macrófagos. 7,15,10

Romanelli y colaboradores en 1999, propusieron que la MMP-13 es producida tanto por células epiteliales como por células mesenquimales en tejido conectivo inflamado, en remodelación y/o en sitios de cicatrización. 11 La muestra de pacientes sanos no expresó MMP-13 en ninguno de los estratos tisulares, posiblemente por no encontrarse en ninguno de los procesos fisiológicos mencionados.

Seymour y colaboradores en 1996, reportan con estudios in vitro, que el agrandamiento gingival inducido por placa bacteriana puede estar más relacionado con la alteración de la integridad del colágeno, que con la producción del mismo. Estos hallazgos han sido soportados por la evidencia de que fibroblastos de pacientes con agrandamiento gingival producen una colagenasa inactiva, favoreciendo así la deposición de colágeno. También se ha mostrado que los fibroblastos gingivales son heterogéneos respecto a su habilidad para sintetizar colagenasas y los inhibidores tisulares de las metaloproteinasas (TIMPs), y el aumento en la síntesis de éstos útimos, quizás sea más significativo que la disminución en la actividad de las colagenasas. 16 En este estudio la expresión e inmunolocalización de MMP-13 en tejido de agrandamiento gingival inducido por placa bacteriana mostró que ésta proteasa se expresa en todos los estratos tisulares, presentando la mayor expresión en el epitelio oral y la menor en el tejido conectivo adyacente al epitelio de unión. Al no tener reportes previos de la literatura para comparar los resultados obtenidos en éste estudio, podemos decir que la expresión de MMP-13 en esta patología se puede deber a un desbalance en los TIMPs, (estando estos aumentados) o a una producción excesiva de colágeno. Otra posible explicación a la expresión de la MMP-13 en estas biopsia de tejido gingival de pacientes con agrandamiento gingival inducido por placa bacteriana, seria lo planteado por Uitto y colaboradores en 1998, quienes sugieren que no es necesaria la presencia de un infiltrado inflamatorio, para la expresión de ésta MMP.

Al realizar la comparación intergrupo de los tejidos de pacientes con agrandamiento gingival inducido por placa bacteriana y de los pacientes sanos, se observó una mayor expresión de MMP-13 en todos los estratos tisulares, estableciéndose una diferencia estadísticamente significativa.

Al analizar la situación de las biopsias de agrandamiento gingival inducido por placa bacteriana en los cuatro estratos tisulares, se observó que los promedios de expresión de la MMP-13 en los tejidos epiteliales tendían a comportarse de manera similar, al igual que los tejidos conectivos.

La expresión de MMP-13 en biopsias de pacientes con periodontitis crónica fue mayor (p £ 0.05) al ser comparado con las biopsias gingivales de tejido dental sano, pudiéndose establecer una asociación entre la expresión elevada de MMP-13, en la periodontitis crónica, y el daño tisular en esta patología. Al analizar los promedios de expresión de la MMP-13, en los diferentes estratos tisulares, se encontró una expresión aumentada en el epitelio oral, por otro lado, la expresión de MMP-13 en los tejidos conectivos tendía a comportarse de manera similar.

Uitto y colaboradores en 1998, encontraron que la expresión de MMP-13 es inducida específicamente en células epiteliales indiferenciadas, durante la inflamación crónica, debido a la exposición a citoquinas y colágeno, así, parece ser que la expresión de MMP-13 es un instrumento en la colagenolisis subepitelial e invasión local de epitelio dentro del conectivo. 7 Además se podría asociar la presencia de abundantes células plasmáticas positivas para la MMP-13 en las biopsias de tejido con periodontitis crónica, con el hecho de que los plasmocitos se encuentran presentes típicamente en sitios con inflamación crónica y participan en enfermedades inflamatorias destructivas. 17

El marcaje para la MMP-13 en el caso de las biopsias con periodontitis agresiva fue inferior al mostrado para la periodontitis crónica e incluso para el agrandamiento gingival, en todos los estratos tisulares a excepción del epitelio oral donde la MMP-13, mostró una expresión al igual que en la periodontitis crónica del 100%. Cuando se analizan los estratos tisulares se observa el comportamiento similar de la expresión en los tejidos conectivos, mientras que en el epitelio sulcular presenta un amplio rango de variabilidad. Se podría pensar que las células epiteliales sintetizan esta colagenasa y que además la destrucción tisular puede estar mediada por otras proteasas, no siendo la MMP-13 la más importante en la fisiopatogenia de la enfermedad periodontal agresiva. 15 Otro fenómeno que podría explicar el hecho de que la expresión de la MMP-13 sea menor en este tipo de enfermedad periodontal, es que en la periodontitis crónica y en el agrandamiento gingival inducido por placa bacteriana, hay un posible aumento de los TIMPs.

CONCLUSIONES

Las células que expresan MMP-13 son: Epiteliales, fibroblastos, y células plasmáticas.

La MMP-13 no se expresa en biopsias de individuos sanos. La m ayor expresión de MMP-13 se encontró en periodontitis crónica, seguida por el agrandamiento gingival y finalmente periodontitis agresiva. Las biopsias de tejidos con periodontitis crónica mostraron la mayor expresión de MMP-13, en todos los estratos tisulares. El epitelio oral fue el estrato tisular con mayor expresión de MMP-13, por la presencia de queratinocitos y el alto recambio. La expresión de MMP-13 no se limita solamente al tejido conectivo adyacente al epitelio de unión sino que se encuentra similar expresión en el conectivo profundo.

RECOMENDACIONES

Cuantificar la expresión de MMP-13 utilizando un software como el KS-300, para obtener resultados más precisos.

Realizar estudios de la expresión de TIMPs de MMP-13, en los mismos grupos de pacientes.

Estudiar la expresión de otras MMPs diferentes a la MMP-13 para poder involucrarlas en el modelo de patogénesis de la enfermedad periodontal.

Tabla 1. Porcentaje de área de expresión, según patología y estrato tisular.

EO: Epitelio Oral. EU: Epitelio de Unión. CAEU: Conectivo Adyacente al Epitelio de Unión. CP: Conectivo Profundo. AGIB: Agrandamiento Gingival Inducido por Placa Bacteriana. PC: periodontitis Crónica. PA: Periodontitis agresiva. S: sanos.

Tabla 2. Distribución de MMp-13 en los diferentes estratos tisulares según patología periodontal.

Gráfica 1. Distribución de MMP-13 en los diferentes estratos tisulares según patología periodontal.

Tabla 3. Pruebas U de Mann-Whitney para la expresión de MMP-13 de sanos vs agrandamiento gingival

Tabla 4. Pruebas U de Mann-Whitney para la expresión de MMP-13 de sanos vs periodontitis crónica.

Tabla 5. pruebas de U de Mann-Whitney para la expresión de MMP-13 de sanos vs periodontitis agresiva.

Tabla 6. Expresión de la MMP-13 en los diferentes estratos tisulares.

Gráfica 2. Expresión de la MMP-13 en los diferentes estratos tisulares.

Gráfica 3. Expresión de MMP-13 según patología y estrato tisular.

Tabla 7. Pruebas de análisis de varianza de Friedman para la expresión de MMP-13 entre los diferentes estratos tisulares dentro del grupo total y de cada grupo patológico.

BIBLIOGRAFÍA

• Greenstein,-G. Nonsurgical periodontal therapy in 2000: a literature review. J- Am- Dent- Assoc. 2000. Nov; 131 (11) : 1580 -90
• Ryan, - M; Golub,-L. Modulation of matrix metalloproteinase activities in periodontitis as treatment strategy. Periodontol -2000. vol. 24 ,2000, 226-38
• Dahan, -M; Nawrocki, -B; Elkaim,-R; Soell,-M; Bolcato-Bellemin,- A-L; Birembaut,-P; Tenenbaum,-H. Expression of matrix metalloproteinases in healthy and diseased human gingival. J-Clin-Periodontol. 2001. Feb; 28 (2): 128-36.
• Havemose -Poulsen, -A; Holmstrup, -P; Stoltze , -K; Birkedal - Hansen, -H. Dissolution of type I collagen fibrils by gingival fibroblasts isolated from patients of various periodontitis categories. J- Periodontal- Res. 1998 Jul; 33 (5) :280-91
• Decarlo, -A-A; Grenett, -H-E; Harber, -G-J; Windsor, -L-J; Bodden, -M-K; Birkedal – Hansen, -B; Birkedal- Hansen, -H. Induction of matrix metalloproteinases and a collagen- degrading phenotype in fibroblasts and epithelial cells by secreted Porfiromonas gingivalis proteinase. J- Periodontal- Res. 1998 Oct; 33 (7) : 408- 20
• Ingman, -T; Tervahartiala, -Tding, -Y; Tschesche, -H; Haerian, -A; Kinane, D-F; Konttinen, -Y-T; Sorsa- T. Matrix metalloproteinases and their inhibitors in gingival crevicular fluid and saliva of periodontitis patients. J- Clin- Periodontol. 1996 Dec; 23 (12) : 1127 – 32 Uitto, - V-J; Airola, - K; Vaalamo,- M; Johansson,- N; Putnins, - E; Lopez-Otin, - C; Salonen- Kere, -U; Kahäri, - V-M. Collagenase-3 (matrix metalloproteinase-13) expresion is induced in oral mucosa epithelium during chronic inflammation. Am J Pathol 1998, 152: 1489-1499.
• Ejeil,-A.L.;Tchen,-S.I; Ghomrasseni,- Pellat,-B; Godeau,-G; Gogly,-B.Expression of matrix metalloproteinases (MMPs) and Tissue Inhibitors of Metalloproteinases (TIMPs) in healthy and diasead human gingiva. J Periodontol 2003; 74: 188-195.
• Korostoff, -J-M; Wang, -J-F; Sarment, -D-P; Stewart, -J-C; Feldma, -R-S; Billings, -P-C. Analysis of in situ protease activity in chronic adult periodontitis patients:expression of activated MMP-2 and a 40 kDa serine proteasa. J Periodontol 2000 Mar; 71 (3):353-60
• Kiili, - M; Cox,- S; Chen, - H; Wahlgren, - J; Maisi, - B; Eley, - B; Salo, - T; Sorsa, - T.Collagenase – 2 (MMP-8) and collagenase – 3 (MMP-13) in adult periodontitis: molecular forms and levels in gingival crevicular fluid and inmunolocalisation in gingival tissue. J Clin Periodontol 2002; 29: 224-232
• ROMANELLI, - R; MANCINI,- S; LASCHINGER,-C; OVERALL,-C; SODEK,-J; Mcculloch,-G. Activation of neutrophil collagenase in periodontitis. Infection and immunity, may 1999, pag 2319-2326
• Eley, -B-M; Cox, -S-W. Advances in periodontal diagnosis 7. Proteolytic and hydrolytic enzimes link with periodontitits. Br-Dent-J. 1998 Apr 11; 184 (7): 323-8
• Reynolds J, Meikle M. Mechanisms of connective tissue matrix destruction in periodontitis. Periodontol 2000, vol.14, 1997:144-157.
• Woolley,-D; Davies,-R. Immunolocalization of collagenase in periodontal disease. J Periodont Res 1981, 16: 292-297
• Tervahartiala,-T; Pirilä,-E; Ceponis,-A; Maisi,-P; Salo,-T; The in vivo expresión of the collagenolytic matriz metalloproteinases (MMP-2,-8,-13, and –14) and matrilysin (MMP-7) in adult and localized juvenile periodontitis. J Dent Res 2000; 79 (2): 1969-1977.
• Seymour,-R.A.; Thomason,- Jm; Ellis,- Js. The patogenesis of drug- induced gingival overgrowth. J Clin Periodontol 1996; 23 : 165-175
• Wahlgren,-J; Maisi,-P; Sorsa,-T; Sutinen,-M; Tervarhartiala,-T; Pirilä,-E; Expression and induction of collagenases (MMP-8 and –13) in plasma cells associated with bone- destructive lesions. J pathol 2001; 194: 217-224.